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      離心機的操作方法

      2021-8-27 12:27:49 點擊數:

      接下來介紹一種采用本法所提染色體DNA,可直接應用于常規的分子生物學實驗,包括PCR、限制性內切酶的切割,以及基因組文庫的構建。其中,有個關鍵性實驗設備——離心機,少了它可不行。

        1、 取1ml過夜培養菌液于8000g,離心機離心2min。去除培養基后,用400ul STE緩沖液(100mM NaCl,10mM Tris/HCl,1mM EDTA,pH8.0)重懸菌體,按相同條件離心清洗菌體兩次。

        2、 收集的菌體用200ul TE緩沖液(10mM Tris/HCl,1mM EDTA,pH8.0)懸起后加約50mg 直徑425-600um 規格的玻璃珠,再加入100ul Tirs飽和苯酚。

        3、 上述混合液在漩渦振蕩器上振蕩(細菌,振蕩60s;酵母,振蕩120s-200s),隨后于4℃,13000g,離心5min。

        4、 吸取上層水相(約160ul)轉移至一個新的離心管中,加TE緩沖液補至200ul,再加入100ul氯仿混勻后,于4℃,13000g,離心5min。重復此步兩到三次。

        5、 轉移上層水相(約160ul)至一個新的離心管中,補加40ul TE和5ul RNase(10mg/ml),37℃消化10min。

        6、 加入100ul 氯仿混勻于4℃,13000g,離心機離心5min。

        7、 轉移上層水相(約150ul)至一個新的離心管中。




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